当影像学检查表明存在癌症时，通常需要进行活检来确认。该过程包括从患者身上取出组织样本，然后在显微镜下观察并进行各种测试。乳腺活检的主要类型是细针抽吸（FNA）活检、空芯针活检（CNB）和手术活检（也称为开放活检）。

FNA 活检使用带有小空心针的注射器从可疑区域吸出少量组织或液体。如果感觉到肿块，医生可以通过触摸引导针头。然而，如果不易感觉到肿块，医生可能会使用超声波来指导手术。 FNA 活检是最简单的活检类型，因为它快速且不需要任何切口，因此不需要缝合。然而，如果针放置不正确或吸出的癌细胞不足，FNA 活检可能会漏掉癌症。在某些情况下可能需要进行第二次活检。对于 FNA 活检，可以使用局部麻醉剂，但通常不需要，因为针很细。

CNB 通常是乳腺癌的首选活检方法，因为它比 FNA 活检获得的组织更多，但不需要开放手术。 CNB 使用空心针从可疑区域吸出组织，使用弹簧加载工具快速将针移入和移出组织，或使用抽吸装置。通常，会去除几个小的组织圆柱体（核心）。医生可能会通过摸摸肿块来放置针头，但通常需要超声、MRI 或乳房 X 光检查等影像学检查来指导手术。随后通常会将一个小的组织标记（夹子）放入活检区域，以便在需要进一步治疗时可以通过成像技术来定位该区域。 CNB 通常在局部麻醉下进行。

还有一些特殊类型的 CNB，例如立体定向 CNB 和真空辅助活检 (VAB)。立体定向 CNB 使用不同角度的乳房 X 光检查图像来查明可疑区域。这通常用于超声成像无法清楚看到的非常小的肿块。 VAB 使用一个空心探针，通过一个小切口放置到可疑区域。使用成像技术来引导探针，然后将组织核心吸入探针中并使用旋转刀切除。 VAB 比标准 CNB 去除更多的组织，并且可以从一次切口中获取多个组织样本。

如果针刺活检没有得出结论，在某些情况下可以进行手术活检。手术活检在手术过程中切除部分或全部可疑区域。这种类型的活检可以是切除性的，意味着整个可疑区域和通常周围组织的一小部分被去除，或者是切开性的，意味着仅去除部分可疑区域。如果不易摸到肿块，可以使用超声波、乳房 X 光检查或 MRI 进行术前定位，以引导外科医生找到可疑区域。这涉及将金属线或其他定位装置（例如放射性种子、磁性种子或射频反射器）放入可疑区域。当使用金属线时，该过程可称为立体定向线定位。手术活检可以在局部麻醉下进行，并使用静脉注射镇静剂使患者昏睡，或在全身麻醉下进行，使患者入睡。